NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix, 50 rxns

NEBuilder HiFi DNA Assembly Master Mix wurde entwickelt, um die Effizienz und Genauigkeit der DNA-Assemblierung zu verbessern. Diese Methode ermöglicht die nahtlose Assemblierung mehrerer DNA-Fragmente, unabhängig von deren Länge oder Endkompatibilität. Sie wurde bereits zur Assemblierung einzelsträngiger Oligonukleotide sowie von DNA-Fragmenten unterschiedlicher Größe mit variierenden Überlappungen (15–30 bp) eingesetzt. Aufgrund ihrer einfachen Anwendung, Flexibilität und des unkomplizierten Mastermix-Formats ist sie sowohl für die synthetische Biologie als auch für alle, die an der einstufigen Klonierung mehrerer Fragmente interessiert sind, von großem Nutzen. Die Reaktion umfasst verschiedene Enzyme, die im selben Puffer zusammenarbeiten.
Die Exonuklease erzeugt einzelsträngige 3'-Überhänge, die das Zusammenfügen von Fragmenten ermöglichen, die an einem Ende komplementär sind (die Überlappungsregion).
Die Polymerase füllt Lücken in jedem zusammengefügten Fragment.
Die DNA-Ligase verschließt Einzelstrangbrüche in der zusammengesetzten DNA.
Das Endergebnis ist ein doppelsträngiges, vollständig verschlossenes DNA-Molekül, das als Matrize für PCR, RCA oder eine Vielzahl anderer molekularbiologischer Anwendungen, einschließlich der direkten Transformation von E. coli, dienen kann.